紫外可見分光光度計(jì)各類常規(guī)問題匯總
目錄：
二、紫外可見分光光度計(jì)的分類（按儀器結(jié)構(gòu)分類）
四、紫外可見分光光度計(jì)在生命科學(xué)中的應(yīng)用
五、紫外可見分光光度計(jì)在計(jì)量領(lǐng)域中的應(yīng)用
七、紫外可見分光光度計(jì)技術(shù)參數(shù)（尤尼柯）
八、紫外可見分光光度計(jì)中的單色器結(jié)構(gòu)
十五、紫外可見分光光度計(jì)與紫外分光光度計(jì)的區(qū)別
為了方便廣大用戶能更方便的了解紫外可見分光光度計(jì)知識(shí)，上海巴玖技術(shù)人員為用戶們整理了紫外可見分光光度計(jì)的常見問題，希望以下信息能夠?qū)δ兴鶐椭?/span>
紫外可見分光光度計(jì)是分析行業(yè)不可缺少的儀器之一，它在科技領(lǐng)域的作用是非常之大的，主要是用來做定量分析、純度分析、參與結(jié)構(gòu)分析（結(jié)構(gòu)簡單的樣品可直接作結(jié)構(gòu)分析）、參與定性分析（結(jié)構(gòu)簡單的樣品可直接作定性分析）；特別是在定量分析和純度檢查方面。紫外可見分光光度計(jì)可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工等多個(gè)領(lǐng)域。
二、紫外可見分光光度計(jì)的分類（按儀器結(jié)構(gòu)分類）
1.單光束紫外可見分光光度計(jì)
單光束紫外可見分光光度計(jì)是世界上紫外可見分光光度計(jì)，單光束紫外可見分光光度計(jì)只有一束單色光，一只比色皿，一只光電轉(zhuǎn)換器( 又稱光接收器)。其光電轉(zhuǎn)換器通常采用硅光電池、光敏三極管或光電管，其結(jié)構(gòu)簡單、價(jià)格[cheapest，但因其雜散光、光源波動(dòng)、電子學(xué)的噪聲等都不能抵消，故單光束紫外可見分光光度計(jì)的光度[accuracy]度差。
2.雙波長紫外可見分光光度計(jì)
①.雙波長紫外可見分光光度計(jì)都采用兩個(gè)單色器。光源發(fā)出的光被兩個(gè)單色器分別分離出波長為λ1 和λ2 ，通過斬波器將兩束單色光λ1 和λ2 交替入射到同一試樣中，光電倍增管交替地接收到經(jīng)過試樣吸收后的這兩束單色光，并把它們變成電信號(hào)。
②.此類光度計(jì)主要適用于求出試樣中待測組分的含量或濃度。如果試樣中有共存干擾吸收物質(zhì), 則可采用等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法測量。如果試樣的吸收光譜上，有兩個(gè)或兩個(gè)以上組分的吸收峰互相重疊或非常接近，或者有很大的渾濁背景吸收干擾，則可利用導(dǎo)數(shù)光譜來分析測試。以上是根據(jù)光束、比色皿、光電轉(zhuǎn)換器的數(shù)量來分類的，也有人根據(jù)光接收器的類型，把紫外可見分光光度計(jì)分為光電二極管陣列多通道紫外可見分光光度計(jì)、CCD ( 電荷耦合光接收器) 多通道紫外可見分光光度計(jì)等。
3.雙光束紫外可見分光光度計(jì)
雙光束紫外可見分光光度計(jì)是有兩束單色光的紫外可見分光光度計(jì)。它有兩種類型：一種是兩束單色光，兩只比色皿，兩只光電轉(zhuǎn)換器；另一種是兩束單色光，兩只比色皿，一只光電轉(zhuǎn)換器。目前，國內(nèi)外的雙光束紫外可見分光光度計(jì)中，兩只光電轉(zhuǎn)換器的雙光束紫外可見分光光度計(jì)儀器已很少見，絕大多數(shù)或基本上都是一只光電轉(zhuǎn)換器的儀器，特別是高檔雙光束紫外可見分光光度計(jì)，都是一只光電轉(zhuǎn)換器的儀器。這兩種類型的雙光束紫外可見分光光度計(jì)所用的光電轉(zhuǎn)換器基本上全部是光電倍增管( PMT )。
4.準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)
所謂準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)就是有兩束光，但只有一只比色皿的紫外可見分光光度計(jì)。其中，一束光通過比色皿，另一束光不通過比色皿。不通過比色皿的那束光主要起抵消光源波動(dòng)對分析誤差影響的作用。準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)有兩種類型：一種是兩束單色光， 一只比色皿，兩只光電轉(zhuǎn)換器；另一種是一束單色光，一束復(fù)合光，一只比色皿，兩只光電轉(zhuǎn)換器。
紫外可見分光光度計(jì)工作原理是利用一定頻率的紫外--可見光照射被分析的有機(jī)物質(zhì)，引起分子中價(jià)電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長而變化的光譜，反映了試樣的特征。在紫外可見光的范圍內(nèi)，對于一個(gè)特定的波長，吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度，因此測量光譜可以進(jìn)行定性分析，而且根據(jù)吸收與已知濃度的標(biāo)樣的比較，還能進(jìn)行定量分析。
四、紫外可見分光光度計(jì)在生命科學(xué)中的應(yīng)用
1.糖類分析測試工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計(jì)在糖的分析中，主要是作定量檢測。因?yàn)樘菍ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為218nm，所以，對糖類進(jìn)行分析時(shí)，只要采用光度測量模式，將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO到氨基酸的髙至吸收峰218 nm上，就可測試其吸光度大小，從而計(jì)算出糖的含量。
2.多糖分析測試工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計(jì)在多糖的分析中，主要也是作定量檢測。因?yàn)槎嗵菍ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為206nm，所以我們只要采用光度測量模式，將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO 到多糖的髙至吸收峰206 nm 上，就可測試其吸光度大小，從而計(jì)算出多糖的含量。
3.核酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計(jì)在核酸分析中的應(yīng)用，主要是用來對核酸的定量檢測；因?yàn)楹怂岬奈辗逶?/span>260nm。我們只要采用光度測量模式，將紫外可見分光光度計(jì)的波長GOTO 到核酸的髙至吸收峰260nm 上，測試其吸光度大小就是了。
4.蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計(jì)在蛋白質(zhì)的分析中，[much]主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測；一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm，所以，采用光度測量模式，將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的髙至吸收峰波長280nm 上，測試其吸光度大小，就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
5 氨基酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計(jì)在氨基酸分析中的應(yīng)用，主要是用來對氨基酸的定量檢測。因?yàn)榘被釋ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為230nm，所以，我們只要采用光度測量模式，將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO 到氨基酸的髙至吸收峰230nm 上，就可測試其吸光度大小，從而計(jì)算出氨基酸的含量。但是，因?yàn)榘被岱治鰰r(shí)，一般是將它溶解在水中，而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線，所以，在用紫外可見分光光度計(jì)對氨基酸分析檢測時(shí)，要注意防止干擾的問題。此外，還需注意：只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收，多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱，測定時(shí)要衍生化后再測。
五、紫外可見分光光度計(jì)在計(jì)量領(lǐng)域中的應(yīng)用
1.光度[accuracy]度檢測標(biāo)準(zhǔn)片的測試
我國質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局所屬的計(jì)量測試單位，對許多有關(guān)企業(yè)在用的紫外可見分光光度計(jì)的光度[accuracy]度的檢測，一般都是采用標(biāo)準(zhǔn)片( 如中性灰片或某些有特殊吸收峰的透紫石英片) 來進(jìn)行的。總是在一臺(tái)光度[accuracy]度比被檢測儀器要高2～3 倍的儀器上對標(biāo)準(zhǔn)片進(jìn)行標(biāo)定， 而后用這些標(biāo)定過的標(biāo)準(zhǔn)片對被檢測的紫外可見分光光度計(jì)的光度[accuracy]度進(jìn)行檢測。再根據(jù)檢測的數(shù)據(jù), 作出被檢儀器是否合格的判斷。
2.光度[accuracy]度檢測標(biāo)準(zhǔn)液的測試
我國質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局所屬的計(jì)量測試單位，對許多有關(guān)企業(yè)在用的紫外可見分光光度計(jì)的光度[accuracy]度的檢測，有時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)液(如重鉻酸鉀等) 來進(jìn)行。用一臺(tái)光度[accuracy]度比被檢測儀器的光度[accuracy]度要高2～3 倍的紫外可見分光光度計(jì)。對標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行標(biāo)定，而后用這些標(biāo)定過的標(biāo)準(zhǔn)液，來對被檢測的紫外可見分光光度計(jì)的光度[accuracy]度進(jìn)行檢測。再根據(jù)檢測的數(shù)據(jù)，作出被檢儀器是否合格的判斷。
3.雜散光檢測用的標(biāo)準(zhǔn)液的測試
我國質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局的計(jì)量測試單位，對許多有關(guān)企業(yè)在用的紫外可見分光光度計(jì)的雜散光的檢測，有時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)液( 如NaI、NaNO2 等) 來進(jìn)行。用一臺(tái)光度[accuracy]度比被檢測儀器的光度[accuracy]度要高2～3 倍的紫外可見分光光度計(jì)，對標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行標(biāo)定，找出檢驗(yàn)測試點(diǎn)的位置，而后用這些標(biāo)定過的標(biāo)準(zhǔn)液對被檢測的紫外可見分光光度計(jì)的雜散光進(jìn)行檢測。再根據(jù)檢測的數(shù)據(jù), 作出被檢儀器是否合格的判斷。
4.雜散光測試的標(biāo)準(zhǔn)片的測試
有時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)片(將NaI、NaNO2 固化在石英片基中) 來測試紫外可見分光光度計(jì)的雜散光。用一臺(tái)雜散光比被檢測儀器要高2～3 倍的紫外可見分光光度計(jì)，對標(biāo)準(zhǔn)片進(jìn)行標(biāo)定找出檢驗(yàn)測試點(diǎn)的位置，而后用這些標(biāo)定過的標(biāo)準(zhǔn)片，對被檢測的紫外可見分光光度計(jì)的雜散光進(jìn)行檢測。再根據(jù)檢測的數(shù)據(jù)作出被檢儀器是否合格的判斷。
1.采用低雜散光，高分辨率的單光束單色器，波長范圍200-1000nm
2.采用[much]新微機(jī)處理技術(shù)，自動(dòng)調(diào)0%T和100%T。
3.儀器具有已知標(biāo)樣濃度法及已知標(biāo)樣系數(shù)法測定未知樣品濃度功能。
4.儀器配有標(biāo)準(zhǔn)的RS-232雙向通訊接口，可外接打印機(jī)。
5.儀器可配可在視窗（WINDOWS98，ME，XP）操作平臺(tái)上運(yùn)行UNICO應(yīng)用軟件。
6.寬大的樣品槽，可容納100mm光徑吸收池。
七、紫外可見分光光度計(jì)技術(shù)參數(shù)（尤尼柯）
1.波長范圍（nm）: 200-1000nm
2.波長精度（nm）： ±2.0nm
3.光譜帶寬(nm)：4nm
4.光度精度：±0.3%T
5.雜散光：≤0.2%T 在220nm和360nm處
6.穩(wěn)定性： ±0.003A/h,在500nm處
7.光學(xué)系統(tǒng)：單光束，1200條/毫米衍射光柵
8.波長重復(fù)性：±1.0nm
9.光度重復(fù)性：0.2%T
八、紫外可見分光光度計(jì)中的單色器結(jié)構(gòu)
1.光柵單色器
①.立特洛( Litt row) 型光柵單色器
光束在光柵上的入射角接近等于衍射角, 準(zhǔn)直物鏡和成像物鏡同用一個(gè)物鏡。這種類型的單色器, 又稱自準(zhǔn)式光柵單色器。因?yàn)樗娜肷洫M縫、出射狹縫很靠近, 所以其雜散光比較大。
②.切爾尼-特納( Czerny-Turner ,簡稱C-T 型) 型光柵單色器
這種光柵單色器是一種采用兩塊球面鏡作為準(zhǔn)直鏡和成像物鏡的系統(tǒng)。常用水平排列方式。兩塊球面鏡可相互補(bǔ)償慧差, 具有較好的成像質(zhì)量。并且,增加狹縫高度不會(huì)嚴(yán)重影響儀器的分辨率。同時(shí), 球面鏡的加工也比較容易。
在該系統(tǒng)中, 入射狹縫S1 和出射狹縫S2 對稱分布在色散元件的兩邊, M1 和M2 分別為準(zhǔn)直鏡和物鏡; 該系統(tǒng)的髙至特點(diǎn)是像差(慧差) 小。它的慧差為自準(zhǔn)直系統(tǒng)的1/ 5 左右, 所以該系統(tǒng)經(jīng)常被大量采用。
③.瀨谷-波岡型凹面光柵單色器
=瀨谷-波岡型凹面光柵單色器是一種羅蘭圓外的裝置, 入射和出射狹縫都在羅蘭圓之外, 光柵上的入射光軸與出射光軸夾角較大, 一般約為i +θ= 70°。在保持入射狹縫和出射狹縫都不動(dòng)的情況下, 繞光柵中心轉(zhuǎn)動(dòng)光柵, 就可完成光譜掃描。一般入射角由26°變?yōu)?/span>44°時(shí), 離焦量才有光柵中心到出射狹縫距離的0. 1%。其主要像差是像散和慧差。但已有消像散的凹面光柵, 可消除型光柵單色器像散, 獲得很高的像質(zhì)。
④.艾伯特( Eber t ) 型光柵單色器
艾伯特( Eber t ) 型光柵單色器是只用一塊凹面球面鏡的兩部分, 作為準(zhǔn)直鏡和物鏡, 代替C- T 型光柵單色器的兩塊凹面球面鏡。
2.棱鏡單色器
①.透射式棱鏡單色器
透射式棱鏡單色器一般采用阿貝型恒偏向棱鏡。直角棱鏡只起反光作用，不參與分光。所以, 阿貝棱鏡可以看成是兩塊30°的色散棱鏡, 它與一塊60°的分光棱鏡的作用相等效。
②.反射式立特洛( Litt row) 型棱鏡單色器
反射式立特洛( Litt row) 型棱鏡單色器的光路圖如圖3-21 所示。該單色器一般是用一塊離軸拋物面鏡同時(shí)起準(zhǔn)直物鏡和成像物鏡的作用。光束兩次通過棱鏡, 可以使色散加倍。
③.自準(zhǔn)式30°棱鏡單色器
在分辨率要求不高的時(shí)候，經(jīng)常采用一塊球面鏡和一塊30°棱鏡組成簡單的立特洛型棱鏡單色器。其光路如圖3-22 所示。該單色器在棱鏡直角邊的一側(cè)涂上反射膜層，使光束經(jīng)此面折回。當(dāng)旋轉(zhuǎn)自準(zhǔn)棱鏡時(shí)，可實(shí)現(xiàn)波長掃描。為減少雜散光，一般在棱鏡膜層后面或不通光的棱邊上涂上黑色無光漆。
④.瓦茨沃斯(Wadswor th) 型棱鏡單色器
該單色器的色散棱鏡和一塊平面反射鏡連在一起，形成恒偏向裝置。波長掃描時(shí)，棱鏡和平面鏡一起繞棱鏡底邊中點(diǎn)C轉(zhuǎn)。該系統(tǒng)有較好的成像質(zhì)量。
3.單色器光路的排列和分類
①.水平式自準(zhǔn)直系統(tǒng)
所謂自準(zhǔn)直系統(tǒng)就是非對稱的單色器光學(xué)系統(tǒng)；所謂水平式自準(zhǔn)直系統(tǒng)就是所有的光學(xué)元件中心和狹縫中心都在同一平面上的自準(zhǔn)直系統(tǒng)。于球面反射鏡或拋物面反射鏡M1 的焦面上。當(dāng)光線進(jìn)入狹縫S1 后，通過小平面反射鏡射到M1 上， M1 將入射的光線變成平行光后,照射到光柵G上，經(jīng)光柵色散后的光線再射到M1 上;還是由M1 聚焦到出射狹縫S2 上， 并在S2 處形成光譜。
②.垂直式自準(zhǔn)直系統(tǒng)
垂直式自準(zhǔn)直系統(tǒng)中，雜散光與球差的數(shù)量與水平式自準(zhǔn)直系統(tǒng)相同。但慧差不同，水平式自準(zhǔn)直系統(tǒng)的慧差使譜線產(chǎn)生非對稱性變寬，而垂直式自準(zhǔn)直系統(tǒng)使譜線在高度方向產(chǎn)生非對稱性伸長。因此，對同樣的光學(xué)參數(shù)來說，該系統(tǒng)的分辨率略優(yōu)于前者。
紫外可見分光光度計(jì)的使用方法
4.用于非平行光束的平面光柵單色器
常見的平面光柵單色器是把光柵放在平行光束中工作，這樣可使光柵產(chǎn)生的像差較小，儀器可以獲得較高的分辨率。但是，在有些專門的用途中，不要求分辨率很高，而要求儀器的通光性能很好。甚至通光性能比分辨率更加重要，這時(shí)可以將光柵放在非平行光束中，整個(gè)光學(xué)系統(tǒng)中除光柵以外,只有一塊凹面反射鏡
5. 雙單色器
單雙色器是將兩個(gè)簡單的單色器連接在一起就組成了雙單色器。雙單色器有一個(gè)入射狹縫、一個(gè)出射狹縫和一個(gè)中間狹縫。中間狹縫既是單色器的出射狹縫，又是第二個(gè)單色器的入射狹縫。
1.首先連接儀器電源線，確保儀器供電電源有良好的接地性能。
2.接通電源至儀器自檢完畢，顯示器顯示“546mm，100.0”即可進(jìn)行測試。
3.用（MODE）鍵設(shè)置測試方式：透射比（T），吸光度（A),已知標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度值方式（C）和已知樣品斜率（F）。
4.用波長設(shè)置鍵，設(shè)置所需要的分析波長，當(dāng)波長改變時(shí)，排顯示器會(huì)顯示BLA字樣，提示下步必須調(diào)OA/100%T，當(dāng)設(shè)置完分析波長后，如沒有調(diào)OA/100%T，儀器將不會(huì)繼續(xù)工作。
5.根據(jù)設(shè)置后的分析波長，再選擇正確的電源，光源的切換位置在335nm處，正常情況下，儀器開機(jī)后，鎢燈和氘燈同時(shí)點(diǎn)亮。
6.將參比樣品溶液和被測樣品溶液分別倒入比色皿中，打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋，比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕跡，被測溶液中不能有氣泡，懸浮物。
7.將參比樣品推入光路中，按OA/100%T鍵調(diào)OA/100%T，此時(shí)顯示器顯示的“BLA--- ---”
直至顯示“100.0”或“0.000”為止。
8.[much]后當(dāng)儀器顯示器顯示出“100.0”或“0.000”后，將被測樣品推“拉”入光路，這時(shí)便可從顯示器得到被測樣品的透射比或吸光度值。
1.在使用過程中，如需開啟試樣室蓋時(shí)或暫時(shí)停止測試時(shí)，必須及時(shí)推入光門鈕桿（使光電管前光門關(guān)閉），保護(hù)光電管，以防止光電管受強(qiáng)光或長時(shí)間照射而損壞。
2.取吸收池時(shí)，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。另外使用完后應(yīng)及時(shí)用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。
3.吸收池應(yīng)選擇配對，否則要引入測定誤差。在規(guī)定波長下兩個(gè)吸收池的透光率相差小于0.5％的吸收池作配對。
4.在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)。
5.在測定時(shí)或改測其它檢品時(shí)，應(yīng)用待測溶液沖洗吸收池3～4次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）。測定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。
6.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過濾，并棄去初濾液。
7.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間的誤差較小。
8.由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。
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現(xiàn)象故障 |
可能原因 |
排除方法 |
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開啟電源開關(guān)，儀器無反應(yīng) |
1.電源未接通 |
1.檢查供電電源和連接線 |
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光源燈不工作 |
1.光源燈壞 |
1.更換新燈 |
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顯示不穩(wěn)定 |
1.儀器預(yù)熱時(shí)間不夠 |
1.延長預(yù)熱時(shí)間 |
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透射比調(diào)不到0 |
1.光門漏光 |
1.修理光門 |
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透射比調(diào)不到100% |
1.鹵鎢燈不亮 |
1.檢查燈電源 |
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測試結(jié)果不正常 |
1.樣品處理錯(cuò)誤 |
1.重新處理樣品 |
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建立濃度方程時(shí)數(shù)值輸不進(jìn) |
1.電路故障 |
1.送生產(chǎn)廠修理 |
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打印機(jī)出錯(cuò) |
操作錯(cuò)誤 |
1.迅速關(guān)機(jī)，稍停后重新開機(jī) |
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打印機(jī)卡紙 |
1.裝紙不當(dāng) |
1.迅速關(guān)機(jī)，稍后重新開機(jī) |
（一）紫外可見分光光度計(jì)光度測量
1.在模式選擇屏幕中選擇＜1. Photometric光度＞選項(xiàng)，將顯示參數(shù)配置屏幕。
2.用GOTOWL鍵設(shè)定測量波長。
3.按F2鍵設(shè)定進(jìn)樣控制。
4.按START/STOP鍵時(shí)，測量開始，顯示測量屏幕。
5.如需做空白校正，應(yīng)在測量前先設(shè)置空白樣品，然后按AUTOZERO鍵，將測量值置為0ABS（100%）。
（二）紫外可見分光光度計(jì)校正
1.開機(jī)預(yù)熱10分鐘足矣。
2.放入黑塊和標(biāo)樣（沒有的自己配），關(guān)閉蓋子。
3.校0：a把燈光對著黑塊，把透光度調(diào)0，b把燈光對標(biāo)樣，將吸光度調(diào)到100%。
（三）參比溶液介紹
參比溶液又稱空白溶液。測量時(shí)用作比較的、不含被測物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應(yīng)是一條平坦的直線。有時(shí)，基體中雖不含被測物質(zhì)，但含有別的物質(zhì)，這時(shí)必須保證其不影響測試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測物質(zhì)，此時(shí)必須經(jīng)過純化將其除去。否則將影響測定結(jié)果。
1.紫外可見分光光度計(jì)出現(xiàn)誤差因素
1.雜散光是影響紫外可見分光光度計(jì)誤差的主要因素，它直接限制被分析測試樣品濃度的上限。當(dāng)一臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)的雜散光一定時(shí)，被分析的試樣濃度越大，其分析誤差就越大。ASTM 認(rèn)為：“雜散光可能是光譜測量中主要誤差的來源。尤其對高濃度的分析測試時(shí)，雜散光更加重要”
2.雜散光的來源
① 灰塵沾污光學(xué)元件( 如光柵、棱鏡、透鏡、反射鏡、濾光片等)。
② 光學(xué)元件被損傷, 或光學(xué)元件產(chǎn)生的其他缺陷( 如光柵、透鏡、反射鏡、棱鏡材料中的氣泡等)。
③ 準(zhǔn)直系統(tǒng)內(nèi)部或有關(guān)隔板邊緣的反射。
④ 光學(xué)系統(tǒng)屏蔽不好。
⑤ 熱輻射或熒光引起的二次電子發(fā)射。
⑥ 狹縫的缺陷。
⑦ 光束孔徑不匹配。
⑧ 光學(xué)系統(tǒng)的像差。
⑨ 單色器內(nèi)壁黑化處理不當(dāng)。
3.雜散光的測試方法
目前，測試雜散光[much]常用的方法是所謂“ 截止濾光法” ( T he Cut Off FilterMethod) 或稱作“ 濾光片法” ( The Filte r Method) 。主要是采用濾光片或?yàn)V光液來測試紫外可見分光光度計(jì)的雜散光。有時(shí)也采用He-Ne 激光器的632. 8nm 來測試雜散光。具體做法是在離632. 8nm±5nm 處進(jìn)行測試，測出的數(shù)值與632. 8nm 相比就是雜散光。“截止濾光法” 的具體測試方法：儀器冷態(tài)開機(jī)，預(yù)熱0. 5h，如用“濾光片法” 測試，則參比為空氣；如用濾光液來測試，則參比為溶劑(若用NaI、NaNO2 水溶液，則參比為蒸餾水)。設(shè)置儀器的縱坐標(biāo)為% T，橫坐標(biāo)為波長 nm) ，用濾光液時(shí)，試樣比色皿中裝濾光液，參比比色皿中裝溶解液，將波長調(diào)到相應(yīng)的波長上( NaI 為220nm、NaNO2 為340nm) 進(jìn)行測試。
1.考慮分光光度計(jì)的光譜：其是一個(gè)重要的考慮因素，如需要更大的靈活性，建議選擇一種更高性能的寬光譜儀器，可程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。
2.穩(wěn)定性：它是用戶[much]關(guān)注的指標(biāo)之一。儀器的宗旨就是穩(wěn)定可靠，不穩(wěn)定更談不上可靠了。
3.光譜帶寬：指從單色器射出的單色光譜線強(qiáng)度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。表征儀器的光譜分辨率。按照比耳定律，光譜帶寬應(yīng)該是越小越好的，但是如果儀器的光源能量弱，光學(xué)傳感器的靈敏度低時(shí)，光譜帶寬小了，也得不到理想的測量結(jié)果的。所以，選擇和使用儀器時(shí)一定注意。
4.噪聲：也是儀器的重要指標(biāo)之一。它表征儀器的做稀溶液的能力。此指標(biāo)也是越小越好。
5.波長的[accuracy]度和重復(fù)性：儀器的每個(gè)值都是在一定的波長下測得的，如果所示的波長和實(shí)際波長偏差萬里，那么測出的值和真值的吻合度從何談起呢？此指標(biāo)也是非常重要的。
十五、紫外可見分光光度計(jì)與紫外分光光度計(jì)的區(qū)別
1.紫外可見分光光度計(jì)測量的范圍較大，由于各種不同光波發(fā)射的燈管不同，紫外分光光度計(jì)和紫外可見分光光度計(jì)就有所不同。
2.一般紫外分光光度計(jì)量程200nm->500~600nm間（包括部分可見光），
3.紫外可見分光光度計(jì)在340nm~1000nm，紫外可見分光光度計(jì)可調(diào)節(jié)200nm~1000nm。
4.同一種方法用不同的儀器去檢測誤差是很大的，幾乎可達(dá)到5%。如用同一種儀器在不同空間和時(shí)間下測量的數(shù)據(jù)誤差也能達(dá)到1%，但測量后經(jīng)過各自的空白校正，相信誤差便不會(huì)超過1%，所以用不同的儀器測量數(shù)據(jù)整理后都是可以通用的，但沒有經(jīng)過空白校正的數(shù)據(jù)不能互相代替。
注意：用紫外分光時(shí)一定要用石英比色皿，不可用玻璃比色皿，因紫外線很難透過玻璃。
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